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如何得到一張漂亮的瓊脂糖凝膠電泳圖

華雅思創(chuàng)生物推出一波分子產(chǎn)品，電泳是分子最基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)，今天華雅思創(chuàng)先和大家聊聊如何得到一張漂亮的電泳圖。

做一塊優(yōu)質(zhì)的瓊脂糖凝膠

“工欲善其事，必先利其器”，能否做一塊好的瓊脂糖凝膠，直接影響到后面電泳和結(jié)果的分析。制膠前，給大家的建議：

1.?在制膠時(shí)必須將制膠模具、梳子以及燒杯等物品洗凈，以免干膠及其他雜質(zhì)帶入；

2.?在溶膠時(shí)應(yīng)觀察溶液中是否有未溶解的瓊脂糖顆粒，確保溶膠完全；

3.?在溶液倒入制膠模具前必須充分混勻，以免制出來的膠出現(xiàn)不均勻的現(xiàn)象。

圖一：制膠時(shí)帶入了其它雜質(zhì)，形成了障礙物，使得DNA條帶電泳時(shí)受到阻礙無法繼續(xù)電泳，從而形成扭曲帶

圖二：制膠時(shí)溶膠不完全以致瓊脂糖顆粒殘留，形成一些濃度較高的凝膠區(qū)域，在DNA電泳經(jīng)過這些區(qū)域時(shí)，部分DNA被阻礙在這里而形成不規(guī)則亮帶。

合適濃度的瓊脂糖凝膠

凝膠的濃度是常被忽略問題。建議：長片段的DNA選用低濃度的凝膠電泳，短片段的DNA則選用高濃度的凝膠電泳。

表一：分離不同大小的DNA片段所用的最適凝膠濃度

合適的核酸上樣量電泳

要想電泳跑出可見條帶的話，至少需要上樣50 ng，但是0.5 cm寬的梳子最好不超過0.5μg的DNA量，因?yàn)樯蠘恿窟^多會(huì)造成加樣孔超載，從而導(dǎo)致拖尾或彌散，對于較長的DNA此現(xiàn)象更為明顯。另外，加樣量的多少還應(yīng)依據(jù)加樣孔的大小及DNA片段的長度而定，當(dāng)加樣孔大時(shí)，樣品上樣量應(yīng)相應(yīng)加大。

合適的電壓電泳

通常情況下電壓越低，走出的電泳條帶越平整。低電壓電泳時(shí)，電泳緩沖液也不容易發(fā)燙，也能確保在電泳的過程中凝膠不會(huì)變形。當(dāng)然電壓太低，等待電泳結(jié)果的時(shí)間就會(huì)延長，綜合考慮，一般控制電泳電壓≤5V/cm，即可保證電泳條帶的清晰度。

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圖三和圖四同一樣本跑出的圖，但是出來的效果差別非常大，主要是因?yàn)殡娪緯r(shí)的電壓不同

圖三由于電泳的電壓過大，導(dǎo)致電泳條帶都扭曲變形了。

合適的電泳距離（控制電泳時(shí)間）

一些片段的DNA，電泳20-30min家常便飯，有的甚至需要更長的時(shí)間，如果想稍微快一點(diǎn)，可以選用濃度比較稀的凝膠或稍微調(diào)高一點(diǎn)電壓進(jìn)行電泳。

眾所周知，Lonza是世界上久負(fù)盛名的瓊脂糖源生產(chǎn)商，其所產(chǎn)瓊脂糖質(zhì)量上乘、暢銷全球，深受工業(yè)生產(chǎn)和科研用戶的歡迎。選擇正確的瓊脂糖就等于配了一把保險(xiǎn)鎖，幫助您把實(shí)驗(yàn)誤差降至，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更漂亮，更重要的是降低您的實(shí)驗(yàn)成本！

?????SeaKem? Gold Agarose是一種高凝膠強(qiáng)度，低EEO（電滲），標(biāo)準(zhǔn)凝膠溫度的瓊脂糖。SeaKem? Gold Agarose瓊脂糖屬于遺傳技術(shù)級別，?適用于在脈沖場凝膠電泳實(shí)驗(yàn)（PFGE）中快速分離巨大堿基對DNA。低電滲性能使得其在凝膠電泳實(shí)驗(yàn)中DNA電泳遷移率明顯大于使用傳統(tǒng)瓊脂糖，調(diào)節(jié)緩沖液和瓊脂糖濃度可以使跑膠時(shí)間減少一半。高凝膠強(qiáng)度使其在低濃度時(shí)很容易操作，能夠使用傳統(tǒng)電泳分離大DNA片段，減少分離 DNA片段時(shí)間（PFGE）。

產(chǎn)品名稱：SeaKem? Gold瓊脂糖粉

產(chǎn)品貨號：50150

性能

??高凝膠強(qiáng)度；

???低EEO（電滲）≤0.05

??脈沖場凝膠電泳中可分離DNA?50kb-10Mb

??垂直電泳中可快速分離DNA?30kb-50kb

?關(guān)于這些參數(shù)的內(nèi)涵：?

1.?凝膠強(qiáng)度：衡量瓊脂糖性能的關(guān)鍵參數(shù)，凝膠強(qiáng)度越高，凝膠性能越好，可以保證在低濃度下，凝膠性能依然很好，高凝膠強(qiáng)度瓊脂糖適合大分子核酸。Seakem?Gold?Agarose?凝膠強(qiáng)度高，可在0.3%、0.5%的濃度下分離超大片段核酸。

2.?低電滲（Low?EEO）：電滲是一種物理現(xiàn)象，由于瓊脂糖這樣的多孔支持物在電場中會(huì)吸附水中的正負(fù)離子，而使溶液帶電向電極泳動(dòng)，從而干擾核酸或蛋白電泳，?Lonza??Seakem ?Gold ?Agarose金瓊脂糖是低電滲≤0.05，幾乎不干擾核酸電泳。

?應(yīng)用：

??分析長片段?PCR?產(chǎn)物?

??分離和進(jìn)一步操作?DNA?>1,000?bp?

??DNA?& RNA?的分析電泳

??DNA & RNA?印跡? ?

產(chǎn)品信息

品牌	產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱
Lonza	50150	SeaKem? Gold瓊脂糖粉
Lonza	50100	SeaPlaque AGAROSE瓊脂糖125G
Lonza	50110	SeaPlaque GTG AGAROSE瓊脂糖125G
QIAGEN	52904	?Viral RNA Mini Kit?病毒RNA提取試劑盒
QIAGEN	762164	PAXgene Blood RNA Kit
QIAGEN	762174	PAXgene Blood RNA Kit (50)
Thermo	KIT0204 /KIT0214	PicoPure? RNA Isolation Kit
Thermo	15596026/15596018	TRIZOL RNA提取試劑
Bio-Rad	TLS0851	0.2ml低位8聯(lián)薄壁PCR管，無蓋，
Bio-Rad	TLS0803	0.2ml低位9聯(lián)薄壁PCR管蓋，透明光學(xué)級平頂
BD	762165	PAXgene Blood RNA Tube RNA樣本收集管
BD	364606	8.5mL ACD全血玻璃管,A型ACD溶液,
BD	362788	5mL BD血漿準(zhǔn)備管（PPT管）
BD	362799	8.5mL BD血漿準(zhǔn)備管（PPT管）
BD	365967	0.5mL?末梢采血管；金黃色頭蓋
BD	365978	0.5mL?末梢采血管；金黃色頭蓋
BD	365963	0.5mL?末梢采血管；紅色頭蓋