產(chǎn)品名稱：ProteanFect Max 轉(zhuǎn)染試劑盒
規(guī)格：多種規(guī)格可選
簡介：ProteanFect Max 轉(zhuǎn)染試劑盒是全球首款自組裝蛋白納米顆粒核酸轉(zhuǎn)染試劑，專為原代細胞與難轉(zhuǎn)細胞系設(shè)計，能夠?qū)崿F(xiàn)卓越的外源基因遞送與表達。作為一種非病毒、非電轉(zhuǎn)、非脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑，ProteanFect Max 能高效且低毒性地轉(zhuǎn)染 mRNA、siRNA、DNA 等多種核酸。該試劑操作簡便，僅需 5-15 分鐘即可將核酸遞送至細胞內(nèi)，最快在 1 小時內(nèi)觀察到 mRNA 的表達效果。
覽透明-300x257.png)
產(chǎn)品特點與優(yōu)勢：
-
高效轉(zhuǎn)染：能夠高效轉(zhuǎn)染 mRNA、siRNA、DNA 等多種核酸，適用于多種細胞類型。
-
低毒性：對細胞的損傷小，轉(zhuǎn)染后細胞狀態(tài)恢復(fù)快。
-
操作簡便：僅需 5-15 分鐘即可完成轉(zhuǎn)染，最快 1 小時內(nèi)觀察到 mRNA 表達。
-
適用廣泛：適用于原代細胞和難轉(zhuǎn)細胞系，如人原代 T 細胞、Jurkat T 細胞、HepG2 細胞等。
-
陽性對照：試劑盒包含編碼綠色熒光蛋白（EGFP）的 mRNA 和質(zhì)粒 DNA，驗證實驗操作及試劑效果。
產(chǎn)品應(yīng)用：
-
基因表達研究：快速高效地將目標(biāo)基因遞送至細胞內(nèi)，觀察基因表達效果。
-
RNA干擾研究：通過 siRNA 轉(zhuǎn)染實現(xiàn)基因沉默，研究基因功能。
-
細胞功能研究：在原代細胞和細胞系中進行功能研究，如細胞增殖、凋亡、遷移等。
儲存與運輸條件：
實驗前材料準(zhǔn)備：
-
待轉(zhuǎn)染細胞：轉(zhuǎn)染前細胞必須處于良好的生長狀態(tài)，活率＞90%。對于原代細胞，建議在適當(dāng)活化后進行轉(zhuǎn)染。
-
推薦培養(yǎng)基：Opti-MEM 培養(yǎng)基（或無血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基/無血清 DMEM 培養(yǎng)基），提前預(yù)熱或恢復(fù)至室溫。
-
其他：完全培養(yǎng)基，無菌 EP 管、所需轉(zhuǎn)染的核酸樣品。
實驗操作步驟：
-
配置 ProteanFect 轉(zhuǎn)染體系：
-
在 40 μL Reagent A 中加入 0.5 μg mRNA，充分混勻。
-
加入 1.4 μL Reagent B，輕柔充分混勻。
-
對于原代細胞，加入 8 μL Reagent C 混勻。
-
細胞處理：
-
細胞轉(zhuǎn)染：
-
將配置好的 ProteanFect 轉(zhuǎn)染體系與 20 μL 細胞懸液或貼壁細胞混合均勻。
-
37℃孵育 45-60 分鐘（細胞系）或 15-30 分鐘（原代細胞）。
-
加入至少 200 μL 完全培養(yǎng)基，300 g 離心 5 分鐘，棄上清（為避免細胞損失，無需完全棄盡）；對于貼壁細胞，直接棄去混合液，補加培養(yǎng)基。
-
加入適量完全培養(yǎng)基，進行細胞培養(yǎng)，后續(xù)可根據(jù)實驗?zāi)康倪M行基因表達檢測。
常見問題及解決方案：
-
如何提升轉(zhuǎn)染效率：
-
延長轉(zhuǎn)染時間：根據(jù)細胞狀態(tài)適當(dāng)延長轉(zhuǎn)染時間。通常原代細胞不超過 1 小時，細胞系不超過 2 小時。
-
提升 Reagent B 用量：適當(dāng)增加 Reagent B 的用量，以 96 孔板為例，原代細胞推薦為 0.7-1.4 μL，細胞系為 1-3 μL。
-
提升 Reagent C 用量：對于細胞系轉(zhuǎn)染，可在體系中添加適當(dāng)?shù)?Reagent C，以 96 孔板為例，添加 8-13.5 μL，孵育 15 分鐘，最長不超過 45 分鐘；原代細胞則可將 Reagent C 體積增加至 13.5 μL，孵育時間同樣不超過 45 分鐘。
-
提升 ProteanFect 轉(zhuǎn)染量：適當(dāng)增加轉(zhuǎn)染體系至初始的 1.5-2.5 倍。
-
質(zhì)粒 DNA 能否用于原代細胞轉(zhuǎn)染：
-
質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染要求：
-
細胞系轉(zhuǎn)染前處理：
-
為獲得良好的轉(zhuǎn)染效率，建議使用活性超過 90%的細胞，可以通過臺盼藍染色測定細胞活性。
-
不建議使用傳代次數(shù)超過 15 次的細胞進行實驗。
-
新復(fù)蘇的細胞在轉(zhuǎn)染實驗前需傳代 2-3 次，待細胞恢復(fù)正常生長后使用。
-
原代細胞轉(zhuǎn)染前預(yù)處理：
-
關(guān)于試劑盒中陽性對照的使用建議：
-
轉(zhuǎn)染時的細胞數(shù)范圍：
-
轉(zhuǎn)染后細胞狀態(tài)與活力：
-
轉(zhuǎn)染后細胞離心后看不到沉淀：
-
轉(zhuǎn)染體系擴大是否影響轉(zhuǎn)染效率：
-
貼壁細胞如何轉(zhuǎn)染：
